斑马鱼ISL1蛋白多克隆抗体的制备

• 作者: 任恋 刘宪楚 唐超 彭佩莹 戴悦 李容 莫小阳
• 来源期刊: 中南医学科学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: ISL1 斑马鱼 融合蛋白 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 方法技术
• 页码范围: 135-139
• 页数: 5页
• 分类号: Q7
• 字数: 2814字
• 语种: 中文

摘要

目的 为了进一步研究1SL1作为第二生心区心脏前体细胞的分子标志在心脏发育中的功能,需要获得ISL1蛋白并制备其抗体. 方法 根据已报道的ISL1基因序列,以斑马鱼mRNA为模板进行PCR扩增得到ISL1部分编码区序列,然后将其连接到pET-28a栽体上获得原核表达载体.将重组质粒进行酶切测序鉴定,然后利用大肠杆菌E.coli BL21对该重组质粒进行表达.经过IPTG诱导,采用Ni-IDA凝胶柱亲和纯化,将纯化的hisISL1融合蛋白免疫新西兰大白兔制备ISL1多克隆抗体,并用Western Blot检测抗体效价. 结果 获得了ISL1原核表达重组融合蛋白及高效价的特异性兔抗ISL1多克隆抗体. 结论 本实验为ISL1在斑马鱼心脏发育中的新功能的进一步研究奠定了基础.