殊异韦荣菌sahH基因的克隆、表达和纯化

• 作者: 何钟勤 刘晓红 孙晓宇 薛莹 钟丞 高心
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 殊异韦荣菌 S-腺苷同型半胱氨酸水解酶 基因克隆 基因表达 纯化
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 704-709
• 页数: 6页
• 分类号: R378.1
• 字数: 4787字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7694/jldxyxb20130413

摘要

目的:对殊异韦荣菌S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(sahH)基因进行克隆、鉴定、表达和纯化,为研究龋病的微生物致病机制提供理论依据.方法:提取殊异韦荣菌基因组DNA,采用PCR方法扩增sahH基因序列,构建pET28a-sahH重组质粒,转化到大肠杆菌(E.coli) BL21(DE3)感受态细胞中,酶切、PCR鉴定和测序后,IPTG诱导蛋白表达,并进行分离纯化.结果:PCR扩增产物全长为l 410 bp.测序结果经BLAST软件分析,与GenBank中所报道的绿脓假单胞菌sahH基因序列进行对比分析,其同源性为99％.该基因序列已登陆GenBank,序列号为KC477409.SDS-PAGE分析,重组质粒在E.coli JM109中表达并纯化,得到的融合蛋白相对分子质量约为50 000,诱导5h蛋白表达量最高,浓缩后蛋白浓度为5.4g·L-1.Western blotting法得到的蛋白条带与目的蛋白大小相符.结论:成功克隆了殊异韦荣菌sahH基因,并通过基因序列和氨基酸分析证明其具有完整的阅读框架,且重组载体表达出融合蛋白,分离纯化得到目的蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	高心	吉林大学口腔医院牙体牙髓病科	16	45	5.0	5.0
2	刘晓红	吉林大学口腔医院牙体牙髓病科	22	27	3.0	5.0
3	孙晓宇	吉林大学口腔医院牙体牙髓病科	4	6	2.0	2.0
4	何钟勤	吉林大学中日联谊医院口腔科	4	12	2.0	3.0
5	钟丞	吉林省长春市中心医院口腔科	1	0	0.0	0.0
6	薛莹	吉林大学口腔医院牙体牙髓病科	3	3	1.0	1.0