转bFat-1基因载体及牛胚胎成纤维转基因细胞系构建

• 作者: 于永生 刘铮 张立春 曹阳 朴庆林 王晓阳 郭振刚 金海国
• 来源期刊: 黑龙江畜牧兽医（上半月）
• 学科: 生物学
• 关键词: bFat-1基因 载体构建 牛胚胎成纤维细胞 转基因细胞系
• 年，卷（期）: 2013,（11）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 9-12,189
• 页数: 5页
• 分类号: Q813
• 语种: 中文

摘要

为了获取转bFat-1基因牛胎儿成纤维细胞系,试验采用酶切连接方法构建pIRES2-eGFP-bFat-1载体,采用脂质体转染、G418筛选、荧光显微镜观察、基因组PCR和RT-PCR鉴定方法构建重组转bFat-1基因牛胚胎成纤维细胞.结果表明:Sac Ⅰ和Apa Ⅰ双酶切和测序验证pIRES2-eGFP-bFat-1载体构建正确;经脂质体转染,G418筛选去除未转染细胞,最后通过荧光显微镜观察,基因组PCR和RT-PCR鉴定获得了4株既高表达绿色荧光蛋白又高表达bFat-1基因的牛胚胎成纤维转基因细胞株.说明已成功构建了转bFat-1基因载体并构建出转基因细胞系.