Taqman MGB探针实时荧光定量PCR检测布鲁菌病的研究

• 作者: 刘艳红 王清
• 来源期刊: 现代预防医学
• 学科: 医学
• 关键词: Taqman MGB探针 荧光定量PCR 布鲁菌,DNA
• 年，卷（期）: 2013,（7）
• 所属期刊栏目: 实验技术及其应用
• 页码范围: 1348-1351,1356
• 分类号: R378.5
• 语种: 中文

摘要

目的 建立血液标本布鲁菌DNA荧光定量检测方法,探讨其临床应用价值.方法 用PUCm-T载体和PCR纯化产物连接,转染DH5a菌,筛选阳性菌落,提取质粒,制作外标准品；在布鲁菌基因组IS711序列设计一对引物和TaqMan MGB探针,严格优化反应物的组成和扩增条件,并对该方法进行评价.结果 建立的布鲁菌DNA荧光定量PCR方法最低检出率为400拷贝/ml；批内误差为1.8％～6.5％,批间误差为2.6％～9.1％；在4.0×102～4.0×108拷贝/ml之间与Ct值具有很好的线性(Ct =-1.391 1 Ln (x) +41.65,r=-0.995 8)；具有较好的稳定性.在布鲁菌临床监测中发现,157份血液标本,用荧光定量PCR检测与临床检查结果(临床阳性、慢性期患者、症状可疑、阳性畜周围人群与重点职业人群(重点人群)的阳性率和阴性对照的符合率分别为90.3％、40％、6.7％、12.2％和100％.结论 建立的荧光定量PCR检测方法能鉴定布鲁菌种属,具有良好的特异性、灵敏度和稳定性.在临床布鲁菌基因诊断方面具有重要意义.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘艳红	山东省淄博市临淄区妇幼保健院皮肤科	32	40	4.0	4.0
2	王清	青岛大学医学院附属医院检验科	19	115	5.0	10.0