鸡β2-微球蛋白的基因克隆与原核表达

• 作者: 刘秋 吴庚华 徐文财 李旦 秦爱建 胡序明 邵红霞 金文杰 钱琨
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: β2-微球蛋白 基因克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 页码范围: 63-68
• 页数: 6页
• 分类号: S858.312.42
• 字数: 4396字
• 语种: 中文

摘要

本研究通过RT-PCR从正常鸡外周血淋巴细胞总RNA中扩增chβ2m 基因全长片段，然后将其克隆至原核表达载体pET-32a（+），转化大肠杆菌BL21（DE3），用IPTG对其进行诱导表达，利用HiTrap亲和柱对表达产物进行纯化。结果显示，采用RT-PCR扩增出chβ2m基因全长约360 bp，编码120个氨基酸，与基因库公布的相一致，同源性为100%；经0.8 mM IPTG诱导表达后，SDS-PAGE分析发现chβ2m融合蛋白主要以可溶性形式存在于细菌裂解上清；利用His标签纯化该蛋白， SDS-PAGE分析仅见约34 kDa大小的chβ2m融合蛋白条带；Western-blot分析表明，纯化后的chβ2m融合蛋白与特异单克隆抗体反应呈现特异性的条带。以上结果证实，本研究成功表达并获得了纯化的可溶性chβ2m融合蛋白，为进一步对chβ2m结构及其功能研究奠定基础。