鲢小清蛋白的cDNA克隆及在大肠杆菌中的原核表达

• 作者: 刘光明 曹敏杰 王慈 蔡秋凤 詹春兰 郑晓江
• 来源期刊: 中国水产科学
• 学科: 农学
• 关键词: 鲢 小清蛋白 cDNA克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 669-675
• 页数: 7页
• 分类号: S917
• 字数: 4149字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1118.2014.00669

摘要

以鲢(Hypophthalmichthys molitrix)肌肉cDNA为模板,利用小清蛋白特异性引物进行PCR扩增,克隆得到β小清蛋白两种不同亚型,即Ⅰ型、Ⅱ型编码区基因。将目的基因片段连接到 pET28a (+)表达载体,并在大肠杆菌[E.coli BL21(DE3)]中诱导表达。结果表明,经诱导的小清蛋白重组质粒菌株有特异的蛋白表达。SDS-PAGE分析显示,目的蛋白的分子量约为13 kD,与预期大小一致。菌体超声破碎后发现2种亚型的小清蛋白均为可溶表达。利用Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,得到高纯度的重组小清蛋白PVⅠ和PVⅡ。经Western Blot 鉴定,重组小清蛋白 PVⅠ和 PVⅡ均能与抗鲢小清蛋白单克隆抗体反应。本研究为进一步分析小清蛋白的结构与致敏性的关系提供了重要的基础。