刚地弓形虫自噬相关蛋白3基因的克隆表达与多抗制备

• 作者: 万玉静 华倩倩 李相志 潘长旺 胡昕 蒋凯 谭峰 赵徐寒晖 陈弟
• 来源期刊: 中国寄生虫学与寄生虫病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 刚地弓形虫 自噬相关蛋白3 克隆 表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 432-436
• 分类号: R382.5
• 语种: 中文

摘要

目的 克隆、表达刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)自噬相关蛋白3(TgAtg3)基因,并制备能特异性识别该蛋白的多克隆抗体. 方法 以弓形虫RH株cDNA为模板,构建pET28a-TgAtg3重组质粒,转化入大肠埃希菌(E.coli)Rosetta感受态细胞,经自诱导培养基诱导表达,用镍柱亲和层析法纯化诱导表达产物,以小鼠抗His标签单克隆抗体作为一抗,蛋白质印迹(Western blotting)进行鉴定.以纯化的TgAtg3蛋白作为抗原皮下多点注射免疫日本大耳白兔,125μg/(只·次),免疫4次后心脏取血,制备血清,获得特异性抗TgAtg3多克隆抗体.对制备的多克隆抗体进行Westernblotting与间接免疫荧光法(IFA)鉴定. 结果 双酶切、PCR扩增及测序结果证实目的片段序列正确,原核表达质粒pET28a-TgAtg3构建成功.SDS-PAGE和Western blotting结果表明,重组E.coli中可见相对分子质量(Mr)约44000的可溶性TgAtg3蛋白的高效表达.抗体检测Western blotting结果显示,制备的多克隆抗体能特异性识别弓形虫RH株的TgAtg3蛋白.IFA结果显示,该多克隆抗体可与虫体胞浆内TgAtg3结合. 结论 获得重组可溶性TgAtg3蛋白,制备的多克隆抗体能特异性识别弓形虫RH株的天然Atg3蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	谭峰	温州医科大学基础医学院	9	15	3.0	3.0
2	李相志	温州医科大学基础医学院	3	9	2.0	3.0
3	潘长旺	温州医科大学基础医学院	7	65	4.0	7.0
4	华倩倩	东阳市人民医院检验科	2	4	1.0	2.0
5	万玉静	温州医科大学基础医学院	1	3	1.0	1.0
6	陈弟	温州医科大学第一临床医学院	1	3	1.0	1.0
7	赵徐寒晖	温州医科大学第一临床医学院	1	3	1.0	1.0
8	蒋凯	温州医科大学第一临床医学院	1	3	1.0	1.0