重组猪源胰蛋白酶原的构建、表达与活性分析

• 作者: 冯雪婷 刘素丽 曹荣月 王云康 金亮 黄潇 龙军
• 来源期刊: 药学进展
• 学科: 生物学
• 关键词: 猪源胰蛋白酶原基因 包涵体变性 乳糖诱导 稀释复性
• 年，卷（期）: 2014,（12）
• 所属期刊栏目: 药学研究
• 页码范围: 916-921
• 页数: 6页
• 分类号: Q556+.3
• 语种: 中文

摘要

目的:构建、表达重组猪源胰蛋白酶原,并对其进行分离纯化和酶活性分析.方法:利用大肠埃希菌表达系统(pET-28a,宿主菌BL21 DE3)优化天然猪源胰蛋白酶原基因,经乳糖诱导表达重组胰蛋白酶原蛋白,采用阴离子交换色谱法分离纯化,以SDS-PAGE电泳鉴定目标蛋白,以紫外分光光度法检测重组蛋白的酶活力.结果:测序结果表明,重组猪源胰蛋白酶原基因工程菌构建成功,SDS-PAGE检测显示目的蛋白条带位置与标准猪源胰蛋白酶条带位置一致,且酶活力可达513.09 U·mg-1.结论:成功获得了重组猪源胰蛋白酶原,且酶活力较好,为进一步研究生产提供了基础.