人源DCF1基因原核表达载体构建及蛋白分离纯化

• 作者: 冯瑞丽 文铁桥 杨眉 王倩 王娇
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 人源DCF1基因 PTD TAT
• 年，卷（期）: 2014,（12）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 195-200
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2014.12.033

摘要

为了深入研究DCF1(Dendritic Cell Factor 1)基因的作用,以质粒pcDNA3.1-DCF1-TAT为模板体外扩增得到片段DCF1-TAT,将测序正确的目的片段克隆入原核表达载体pET32a,转化大肠杆菌Rosetta(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,并优化表达条件.以尿素溶解包涵体蛋白,并优化溶解条件,通过Ni离子亲和层析柱进行纯化,再透析复性目的蛋白.用SDS-PAGE检测目的蛋白的表达和纯化结果,并用Western blot进行验证.结果表明,重组表达载体pET32a-DCF1-TAT构建成功,并在大肠杆菌Rosetta中成功表达.融合蛋白主要以包涵体形式存在,经过尿素溶解,Ni离子亲和层析柱纯化获得高纯度的目的蛋白.SDS-PAGE和Western blot检测结果显示蛋白分子量大小与预期结果相符.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	文铁桥	上海大学生命科学学院分子神经生物学实验室	24	122	5.0	10.0
2	王倩	上海大学生命科学学院分子神经生物学实验室	21	164	5.0	12.0
3	王娇	上海大学生命科学学院分子神经生物学实验室	11	6	2.0	2.0
4	杨眉	上海大学生命科学学院分子神经生物学实验室	2	1	1.0	1.0
5	冯瑞丽	上海大学生命科学学院分子神经生物学实验室	4	1	1.0	1.0