内切葡聚糖酶基因在黑曲霉中的同源表达

• 作者: 刘君 张会 李杰 江连洲 邓晨旭 陈璐璐 高博
• 来源期刊: 东北农业大学学报
• 学科: 工学
• 关键词: 内切葡聚糖酶 黑曲霉 同源重组 表达
• 年，卷（期）: 2014,（9）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 56-61
• 页数: 6页
• 分类号: TQ925|Q786
• 字数: 3271字
• 语种: 中文

摘要

内切葡聚糖酶作用于纤维素的非结晶区，随机水解β-1，4-糖苷键，将长链的纤维素截断，对纤维素的整体降解起重要作用。研究从黑曲霉CICC2462中扩增得到内切葡聚糖酶基因Eng1，并针对黑曲霉中高表达的糖化酶基因glaA位点，构建Eng1基因表达载体pSZHG-Eng1，进一步通过农杆菌介导法转化黑曲霉CICC2462。经潮霉素筛选和PCR鉴定获得2株在glaA基因位点发生基因置换的同源重组转化子。在摇瓶发酵条件下，发酵液上清中的内切葡聚糖酶活力最高可达到272 U·mL-1，是出发菌株5.2倍。SDS-PAGE分析显示，两株重组菌株都有约36 ku目的蛋白条带，表达量为165~193μg·mL-1。结果表明，研究实现内切葡聚糖酶在黑曲霉中的同源表达，可为食品级内切葡聚糖酶的大规模工业化生产奠定基础。