小鼠CDC26基因短发夹RNA重组腺病毒载体的构建与表达分析

• 作者: 弓蒙蒙 曹培丽 王晓晖 程然然 贺福初 闫永红
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: CDC26 短发夹RNA 腺病毒 血糖
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 656-659
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 2734字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2014.05.013

摘要

目的:构建靶向CDC26基因的短发夹RNA(shRNA)重组腺病毒载体,干扰小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)中CDC26的表达.方法:设计小鼠靶向CDC26基因的shRNA,插入穿梭质粒pENTRY-EF1 a-EGFP-Mir30,通过Gateway系统获得重组腺病毒载体pAd-CDC26-shRNA;线性化后转染HEK293A细胞,进行病毒包装;用包装的重组腺病毒感染MEF,24 h后收集细胞,提取总RNA,逆转录后用荧光定量PCR法检测MEF内CDC26 mRNA的变化,以检测所设计shRNA的敲低效率.结果:构建的重组腺病毒载体pAd-CDC26-shRNA经酶切鉴定后正确;转染HEK293A细胞后8d,观察到细胞病变及GFP的大量表达,表明重组腺病毒包装成功;感染MEF后,实时荧光定量PCR检测表明,细胞内CDC26 mRNA的水平较对照组敲低了73.14％,腺病毒注射7d后,注射CDC26 shRNA的小鼠血糖较对照组明显降低.结论:构建了具有较高敲低效果的小鼠CDC26基因shRNA重组腺病毒,并且具有体内活性.