氨基端PLCε基因的克隆、原核表达及抗血清的制备

• 作者: 吴小侯 宋学东 杜红飞 梁勤东 王胤 罗春丽 范砚茹
• 来源期刊: 免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人磷脂酶Cε 原核表达 抗血清制备
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 33-36
• 页数: 4页
• 分类号: R392.11|Q786
• 语种: 中文

摘要

目的 通过在原核系统中表达人磷脂酶Cε (phospholipase Cε,PLCε)基因,制备兔抗PLCε的抗血清,并验证其特异性.方法 应用RT-PCR从人膀胱癌细胞的cDNA中克隆出部分PLCε基因,构建重组表达载体PGEX-6P-1/PLCε,并转化大肠杆菌BL21,以IPTG诱导表达GST-PLCε融合蛋白,通过GST亲和层析系统纯化重组蛋白,超滤后免疫家兔,获得家兔抗PLCε的抗血清.采用ELISA检测抗血清效价,Western blot测定其特异性.结果 RT-PCR扩增出336 bp的PLCε基因,并成功构建重组质粒PGEX-6P-1/PLCε,质粒测序结果显示,目的基因序列与GenBank中PLCε基因序列完全一致.将纯化后的GST-PLCε蛋白免疫家兔,获得抗血清；ELISA效价1∶16 000以上；Western blot结果显示,该抗血清与原核表达的GST-PLCε融合蛋白和人膀胱癌T24细胞株表达的PLCε蛋白特异性结合.结论 在原核细胞中表达了PLCε蛋白,制备了家兔抗人PLCε的抗血清,可用于相关肿瘤检测,为进一步研究PLCε蛋白功能和作用机制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴小侯		41	124	6.0	9.0
2	罗春丽		119	493	12.0	15.0
3	范砚茹		2	0	0.0	0.0
4	宋学东		4	0	0.0	0.0
5	梁勤东		4	6	2.0	2.0
6	王胤		2	0	0.0	0.0
7	杜红飞		2	2	1.0	1.0