重组人CLK1的真核表达及鉴定

• 作者: 刘艾林 李超 杜冠华 祖勉 连雯雯
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: Cdc2-like kinase 1 真核表达 重组质粒
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 455-459
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 3164字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2014.04.002

摘要

目的：合成真核细胞CLK1（Cdc2-like kinase 1）编码基因，构建CLK1/pEGFP-N2真核表达载体并在真核细胞HEK293A中过表达，为CLK1的生物学功能研究奠定基础。方法：从人脐静脉血管内皮细胞中提取总RNA，采用RT-PCR技术用已知引物合成cDNA，将CLK1基因扩增后插入真核细胞表达载体pEGFP-N2，将重组质粒热转化至大肠杆菌感受态Trans 10细胞中获得重组菌株，提取质粒进行酶切鉴定及插入基因测序；将构建的重组质粒转染HEK293A细胞，用Western印迹及免疫荧光检测CLK1的表达水平，同时对其下游的磷酸化SF2/ASF蛋白进行检测。结果：构建了CLK1/pEGFP-N2真核表达载体，将其转染HEK293A细胞后24 h，CLK1蛋白表达水平最高；同时，CLK1过表达后使得下游的SF2/ASF蛋白磷酸化水平升高。结论：构建了人CLK1基因的真核细胞表达载体CLK1/pEGFP-N2，并在HEK293A细胞中过表达，其生物活性也得到了验证。本研究为外源性CLK1基因在真核细胞中过表达提供了一种途径，为CLK1的生物学功能研究奠定了基础，也可为真核细胞其他蛋白表达体系的构建提供借鉴。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杜冠华	中国医学科学院北京协和医学院 药物研究所	258	3046	28.0	44.0
4	刘艾林	中国医学科学院北京协和医学院 药物研究所	26	133	6.0	11.0
10	李超	中国医学科学院北京协和医学院 药物研究所	24	53	4.0	7.0
11	连雯雯	中国医学科学院北京协和医学院 药物研究所	3	6	1.0	2.0
21	祖勉	中国医学科学院北京协和医学院 药物研究所	1	0	0.0	0.0