甲胎蛋白-增强型绿色荧光蛋白重组体的构建表达及其测量特性分析

• 作者: 张健 王雪亮 葛丹红
• 来源期刊: 检验医学
• 学科: 医学
• 关键词: 甲胎蛋白 绿色荧光蛋白 荧光光谱 融合蛋白 校准品
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究?论著
• 页码范围: 659-663
• 页数: 5页
• 分类号: R446.1
• 字数: 3856字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8640.2014.06.019

摘要

目的：构建增强型绿色荧光蛋白（eGFP）标记的甲胎蛋白（AFP）的融合蛋白，并对其稳定性和测量特性进行分析。方法从pcDNA3．0质粒中扩增eGFP序列，插入质粒PET28a，构建eGFP表达质粒PET28a-eGFP。根据美国国立生物技术信息中心（NCBI）数据库中的AFP编码序列，应用序列合成方法合成AFP编码序列，并加入连接eGFP的铰链序列，与eGFP序列链接，构建表达质粒PET28a-eGFP-AFP。分别表达和纯化重组蛋白eGFP和eGFP-AFP，分析重组蛋白的荧光特性及稳定性。结果成功构建和纯化重组蛋白eGFP和eGFP-AFP，荧光光谱分析显示其激发和发射光谱一致。最佳激发波长和发射波长分别为450和509 nm，且荧光可以稳定12个月。表达的eGFP-AFP 蛋白可以与常规测定 AFP 的免疫试剂发生反应。结论构建表达的重组蛋白eGFP-AFP的荧光特性与eGFP蛋白一致，没有光谱特性变化，并可与常规AFP测定试剂发生反应，为研究eGFP标记的AFP用于校准品和质控品的研究奠定基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张健		18	84	7.0	8.0
2	葛丹红		7	17	2.0	4.0
3	王雪亮		30	62	5.0	7.0