pCDNA3.1-MT2A真核表达载体的构建及亚细胞定位

• 作者: 万志丹 李冬秀 袁春雷 谭家余 陈敬林 黄湘
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: MT2A 载体构建 细胞定位
• 年，卷（期）: 2014,（11）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 1504-1507
• 页数: 4页
• 分类号: R33
• 字数: 2527字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2014.11.014

摘要

目的：构建pCDNA3.1-MT2A真核表达载体并观察其在293T和SMMC7721细胞株中的定位和表达情况。方法：使用基因合成法合成 MT2A 基因，在其 N 端添加 Kozak 序列及 His 标签序列，将扩增后的目的基因双酶切连接至pcDNA3.1（＋）载体的BamHⅠ和NotⅠ之间。转化DH5α大肠杆菌后，挑取阳性克隆子进行质粒抽提电泳及测序鉴定。将鉴定正确的pCDNA3.1-MT2A质粒采用脂质体法转染293T和SMMC7721细胞株，激光共聚焦显微镜观察其在真核细胞中的表达和定位情况。结果：pCDNA3.1-MT2A重组质粒经酶切电泳及DNA测序证实，目的基因MT2A的序列完全正确，真核表达载体构建成功，激光共聚焦观察发现该重组质粒表达于293T和SMMC7721细胞的胞质中。结论：成功构建pCDNA3.1-MT2A融合基因并进行真核表达，发现MT2A主要定位于293T和SMMC7721细胞的细胞质中。本研究为探讨MT2A 在肝癌细胞内的功能奠定了基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄湘	南方医科大学附属中山市博爱医院产前诊断中心	59	175	7.0	9.0
2	万志丹	南方医科大学附属中山市博爱医院产前诊断中心	23	51	4.0	6.0
3	李冬秀	南方医科大学附属中山市博爱医院产前诊断中心	22	54	5.0	6.0
4	袁春雷	南方医科大学附属中山市博爱医院检验科	31	123	7.0	9.0
5	陈敬林	南方医科大学附属中山市博爱医院产前诊断中心	14	46	4.0	6.0