稳定表达靶向BVDV shRNA细胞系的建立及其对BVDV复制的影响

• 作者: 史西保 张改平 樊剑鸣 王丽 王爱萍 范璐
• 来源期刊: 河南农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: RNA干扰 牛病毒性腹泻病毒 短发夹RNA 单克隆细胞系 复制
• 年，卷（期）: 2014,（12）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医
• 页码范围: 134-139
• 页数: 6页
• 分类号: S855.3
• 字数: 3482字
• 语种: 中文

摘要

为研究靶向牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的shRNA对BVDV复制的影响,利用脂质体介导法将BVDV shRNA真核表达质粒pSGH1-sh1083和pSGH1-sh8235及对照质粒pSGH1转染MDBK 细胞,通过G418抗性以及有限稀释法筛选获得BVDV shRNA单克隆细胞系subclonepSGH1-1083 和subclonepSGH1-8235及对照细胞系subclonepshmock.通过观察其细胞病变效应(CPE)、测定TCID50及RT-PCR、流式细胞术检测BVDV shRNA细胞系对BVDV复制的影响.结果表明,与阴性对照组相比,单克隆细胞系subclonepSGH1-1083和subclonepSGH1-8235的细胞在感染BVDV 72 h后CPE不明显,其TCID50低于阴性对照组;RT-PCR结果显示,单克隆细胞系subclonepSGH1-1083和subclonepSGH1-8235的细胞在感染BVDV后病毒E2基因的表达减弱;流式细胞术检测不同细胞系接毒24 h后的结合率,单克隆细胞系subclonepSGH1-1083和subclonepSGH1-8235与病毒结合率分别为11.37％和11.51％,与对照组(20.25％)相比有所降低.综上,稳定转染BVDV shRNA的单克隆细胞系subclonepSGH1-1083和subclonepSGH1-8235对BVDV的复制具有抑制作用.