致病疫霉 NLP 家族基因 PiNLP30的克隆、原核表达及蛋白质纯化

• 作者: 徐进 朱丽丹 朱杰华 杨志辉 赵冬梅
• 来源期刊: 河南农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 致病疫霉 PiNLP30 基因 序列分析 原核表达 蛋白质纯化
• 年，卷（期）: 2014,（10）
• 页码范围: 74-78
• 页数: 5页
• 分类号: S436.32
• 字数: 4638字
• 语种: 中文

摘要

为了制备致病疫霉 NLP 家族中 PiNLP30蛋白的多克隆抗体，根据 GenBank 中 PiNLP30的cDNA 序列及原核表达载体 pET28b 中的多克隆位点设计引物，对 PiNLP30基因进行 RT PCR 扩增和重组质粒 pET28b PiNLP30的构建，将重组质粒在大肠杆菌 BL21（DE3）表达体系中进行诱导表达，通过 SDS PAGE 检测蛋白质表达，并利用镍琼脂糖亲和层析进行蛋白质纯化。克隆和序列分析显示，该基因 cDNA 全长714 bp，编码237个氨基酸。该基因编码蛋白质是一个主要由不规则卷曲组成的亲水蛋白，含有一段19个氨基酸的信号肽序列。预测蛋白质分子量为26·6 kD，等电点5·49。经PCR、酶切及测序验证，成功构建了原核表达载体 pET28b PiNLP30，使用0·6 mmol/L IPTG 于37℃下诱导6 h 后蛋白质大量表达，表达的蛋白质主要以包涵体形式存在。经镍琼脂糖亲和层析进行纯化，获得了纯化的 PiNLP30蛋白，其质量浓度约为0·3 mg/mL。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱杰华	河北农业大学植物保护学院	90	810	17.0	24.0
2	杨志辉	河北农业大学植物保护学院	61	505	13.0	19.0
3	朱丽丹	河北农业大学植物保护学院	5	8	2.0	2.0
4	赵冬梅	河北农业大学植物保护学院	22	48	4.0	5.0
5	徐进	河北农业大学植物保护学院	9	29	3.0	4.0