EMA/PMA-qPCR技术检测活肠炎沙门氏菌方法的对比研究

• 作者: 冯琦 庞贝妮 徐琼 曲勤凤 段文锋 顾文佳
• 来源期刊: 食品科技
• 学科: 工学
• 关键词: 核酸染料 qPCR 肠炎沙门氏菌 区分活死菌
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 食品安全与检测篇
• 页码范围: 298-302
• 页数: 5页
• 分类号: TS207.4
• 语种: 中文

摘要

将DNA染料EMA(Edthidium Monoazide Bromide叠氮溴化乙啶)和PMA(Propidium MonoazideBromide叠氮溴化丙啶)与实时荧光定量PCR技术相结合,通过对曝光时间、染料浓度进行优化,验证EMA/PMA-qPCR技术对于肠炎沙门氏菌活/死菌鉴别方法的可行性;对比2种试剂的作用效果,确定最为适宜的预处理方式.结果表明,使用浓度为10μg/mL的EMA,曝光时间为15 min,可以完全抑制浓度为5×107 cfu/mL的热致死肠炎沙门氏菌的DNA扩增.对于相同浓度的菌悬液,PMA则无法保证与热致死菌DNA分子的有效交联,对于死菌扩增的抑制效果不理想.降低菌液浓度为5×106 cfu/mL,提高PMA的浓度对于活菌的DNA模板有损耗,对热致死菌的抑制效果无改善.EMA-qPCR方法能克服普通PCR无法区别活死菌的缺点,更适宜作为沙门氏菌检测的一种初筛方式.