卟啉病相关胆色素原脱氨酶基因的克隆与原核表达

• 作者: 张明昱 张海峰 李存保 王君 王美玲 郭峰
• 来源期刊: 中国现代医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 卟啉病 胆色素原脱氨酶 重组蛋白 基因工程
• 年，卷（期）: 2014,（32）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 19-24
• 页数: 6页
• 分类号: R589.8
• 字数: 4312字
• 语种: 中文

摘要

目的 主要为了获得胆色素原脱氨酶(PBGD)在大肠杆菌中的原核重组表达蛋白,并对其进行纯化,为下一步研究PBGD结构及功能提供实验基础.方法 以人细胞中的总lRNA逆转录得到的cDNA为模板,PCR扩增,构建pET28a(+)-PBGD重组质粒.把含有外源片段的pET28a-PBGD重组质粒转入大肠杆菌BL21中进行诱导表达,经His纯化方法获得高纯度的PBGD融合蛋白.结果 PCR扩增出大小约1 500 bp的特异PBGD cDNA片段;成功构建了pET28a(+)-PBGD融合表达载体;该表达载体融合表达的蛋白分子量约为44 kD,且大部分纯化蛋白存在于包涵体中.胆色素原脱氨酶的酶活性检测中发现,PBGD的最适酶反应温度为36℃,最适酶反应pH为7.5.结论 该实验已成功地克隆出编码正确的PBGD基因片段,并构建了高效原核融合表达载体:pET28a(+)-PBGD.获得PBGD在大肠杆菌中表达的重组蛋白,并纯化至均一,为PBGD结构和功能的研究提供基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李存保	内蒙古医科大学基础医学院	45	249	8.0	15.0
2	张明昱	内蒙古医科大学基础医学院	16	28	3.0	4.0
3	王美玲	内蒙古医科大学药学院	46	112	6.0	9.0
4	张海峰	内蒙古医科大学基础医学院	19	40	4.0	6.0
5	王君	内蒙古医科大学基础医学院	20	46	3.0	6.0
6	郭峰	内蒙古医科大学党政办公室	1	1	1.0	1.0