重组BirA酶的原核表达及其活性鉴定

• 作者: 唐海科 唐金宝 杨洪鸣 赵爽佳 鲍如梦
• 来源期刊: 药物生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 重组BirA酶 表达 酶活性
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 489-491
• 页数: 3页
• 分类号: Q78|Q591.2
• 语种: 中文

摘要

构建含有rTEV酶切位点的原核表达载体pUC18-His-BirA,利用E coli DH5α表达重组BirA酶,并通过酶切获得不含His标签肽的BirA酶.PCR方式扩增BirA基因片段重组至质粒pUC18,构建原核表达载体pUC18-His-BirA并转化E coli DH5α;采用冻融法释放菌体蛋白,SDS-PAGE分析目的蛋白的存在形式;冻融上清经金属离子亲和色谱纯化获得目的蛋白His-BirA酶,利用rTEV酶切除His标签肽,并采用HABA方法进行BirA酶活鉴定分析.经双酶切验证、基因测序结果表明重组载体构建正确,SDS-PAGE结果显示表达产物可溶部分比例约占50％;利用rTEV酶将标签切除,经HABA测定该酶相对酶活性可达4 365 U/μg.该研究通过构建pUC18-His-BirA质粒表达载体,实现了重组BirA酶较高比例的可溶性表达.表达产物经rTEV酶酶切后具有较高的酶活性,为实现BirA酶的经济、高效制备奠定了一定的实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵爽佳		4	3	1.0	1.0
2	唐金宝		17	48	5.0	6.0
3	鲍如梦		3	1	1.0	1.0
4	唐海科		2	1	1.0	1.0
5	杨洪鸣		9	20	2.0	4.0