重组植酸酶appAM8的异源表达与性质比较

• 作者: 宋玛丽 惠德权 杜军 梁爱华 王茜
• 来源期刊: 应用与环境生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 大肠杆菌植酸酶突变体 糖基化 热稳定性
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 51-56
• 页数: 6页
• 分类号: Q78|Q556
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1145.2014.07033

摘要

为比较在不同宿主中表达的大肠杆菌植酸酶突变体appAM8的性质,将appA M8基因分别在大肠杆菌BL21(DE3)和毕赤酵母GS115中进行表达,对纯化后的植酸酶进行酶学性质分析与比较.结果显示:(1)在大肠杆菌中表达的appAM8 (E-appAM8)和酵母中表达的appAM8 (P-appAM8)的最适pH值均为4.5,最适反应温度均为65℃,与野生型的appA的最适pH无明显区别,比appA的最适温度高了5℃;(2)经SDS-PAGE检测,E-appAM8分子量(Mr)大小为47×103,而P-appAM8为53×103左右,由于在酵母中的糖基化修饰电泳显示为两条带;(3)在60-80℃之间,E-appAM8的热稳定性性明显下降,而且在70 ℃处理15 min后,E-appAM8残余活性仅为4％,而P-appAM8仍保留50％的残余活性,表明酵母表达的植酸酶经过糖基化修饰后提高了酶的热稳定性.(4)E-appAM8的Km=0.245 mmol/L,Vmax=3196 U/mg,P-appAM8的Km=0.36 mmol/L,Vmax=3333 U/mg.本研究表明,糖基化修饰对植酸酶appAM8的热稳定性起着重要作用,8个位点的突变对该植酸酶的稳定性也起到了一定作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	梁爱华		97	555	13.0	18.0
2	王茜		46	537	13.0	22.0
3	杜军		9	15	3.0	3.0
4	宋玛丽		4	7	2.0	2.0
5	惠德权		1	0	0.0	0.0