狂犬病病毒糖蛋白膜外区重组基因的表达与鉴定

• 作者: 付玉荣 伊正君 路静
• 来源期刊: 中国病原生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 狂犬病病毒 糖蛋白膜外区 基因克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2015,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 677-680
• 页数: 4页
• 分类号: R373.9
• 语种: 中文
• DOI: 10.13350/j.cjpb.150802

摘要

目的 构建狂犬病病毒糖蛋白外膜区基因质粒并在大肠埃希菌中表达,为研制狂犬病病毒抗原诊断试剂盒奠定基础. 方法 采用RT PCR方法扩增狂犬病病毒CTN株糖蛋白膜外区基因,目的片段与表达载体PET32a(+)分别经双酶切、胶回收后连接并转化至E.coli BL21(DE3)菌株.阳性重组菌经IPTG诱导表达,表达产物用SDS-PAGE分析后进行纯化,利用Western blot鉴定其反应原性. 结果 以狂犬病病毒CTN株为模板扩增的糖蛋白膜外区基因片段经1％琼脂糖凝胶电泳鉴定大小为1 323 bp,与理论值相符;重组质粒经酶切鉴定后转化入E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达的融合蛋白分子质量单位大小约为66.6 ku,与理论值相符;重组菌在IPTG终浓度为1 mmol/L,诱导时间为4h,温度为37℃时蛋白表达产量最高.该融合蛋白主要以包涵体形式存在,可被His标签抗体识别. 结论 成功表达了狂犬病病毒糖蛋白膜外区蛋白,该蛋白反应原性良好,为研制狂犬病病毒抗原诊断试剂盒奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	付玉荣		136	281	8.0	9.0
2	伊正君		135	257	8.0	8.0
3	路静		6	2	1.0	1.0