狂犬病病毒糖蛋白胞外区基因的原核表达、纯化及鉴定

• 作者: 张改平 杨继飞 杨艳艳 滕蔓 王丽 肖治军 邓瑞广 郅玉宝
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 农学
• 关键词: 狂犬病病毒 糖蛋白 胞外区 纯化
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 页码范围: 28-31
• 分类号: S852.65
• 字数: 2941字
• 语种: 中文

摘要

利用RT-PCR技术,将狂犬病病毒株ERA株糖蛋白胞外区基因分两段进行扩增,经克隆与序列分析,两片段大小分别为523,381 bp,各编码174,127个氨基酸,分子量分别为19.7,14.5 kDa.在原核表达载体pET-43a中分别克隆了这两段糖蛋白基因,将重组质粒转化到表达菌BL21(DE3)中,经SDS-PAGE电泳分析,在分子量约为94,89 kDa处分别出现新蛋白带,和预期的目的蛋白的分子量相符.两重组蛋白主要以可溶形式表达,利用Ni2+亲和层析柱纯化了蛋白,纯度大于95%. Western-Blot分析结果显示,两种重组融合蛋白均可与兔抗RBV多抗血清反应,具有良好的反应原性.