黑莓果实UGT78H2重组蛋白诱导的响应面优化与蛋白纯化

• 作者: 朱芳莉 江雷雨 汤浩茹 王小蓉 王燕 陈清
• 来源期刊: 植物研究
• 学科: 农学
• 关键词: 黑莓 UGT78H2 原核表达 响应面分析 重组蛋白
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 724-729
• 页数: 6页
• 分类号: S663.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.7525/j.issn.1673-5102.2015.05.014

摘要

UGT78H2是从黑莓果实中新发现的一个植物糖基转移酶家族成员,获得重组蛋白是后续深入研究该基因功能的基础.本研究通过构建原核表达载体,并应用响应面分析方法对重组蛋白的诱导条件(如诱导温度、IPTG浓度、菌液浓度和诱导时间)进行了优化,结果表明:(1)构建了pET32a-UGT78H2原核表达载体,并成功导入到BL21(DE3) pLysS细菌中;(2)经响应面优化,在29.5℃培养工程菌至菌液OD600=0.51,加入终浓度为0.4mmol·L-1的IPTG诱导7.4h,可获得最大量重组蛋白166.4 μg·mL-1(占总蛋白41.6％);(3)诱导时间和培养温度极显著地影响重组蛋白表达量,诱导剂IPTG和诱导前菌液浓度之间的交互效应显著影响重组蛋白的表达;(4)获得的带S-tag和His-tag的UGT78H2重组蛋白分子量为67.9 kDa,主要以包涵体形式存在,通过Ni-NTA柱纯化,成功获得了重组蛋白.以上结果为进一步采用酶学方法进行UGT78H2蛋白功能鉴定提供了基础资料.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	汤浩茹		150	2302	23.0	42.0
2	王小蓉		51	624	16.0	23.0
3	陈清		45	318	9.0	17.0
4	王燕		34	103	5.0	9.0
5	江雷雨		13	22	2.0	4.0
6	朱芳莉		1	0	0.0	0.0