拟南芥ZYP1蛋白的原核表达、多克隆抗体制备及细胞学行为分析

• 作者: 位芳 刘征 杨妍 毋瑞华 田保明 程征
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 关键词: 拟南芥 ZYP1 亲和纯化 多克隆抗体 免疫荧光染色
• 年，卷（期）: 2015,（12）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 1568-1575
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2015.12.005

摘要

为分析联会复合体(synaptonemal complex,SC)相关蛋白ZYP1在植物减数分裂过程细胞学行为,本研究通过克隆拟南芥(Arabidopsis thaliana)ZYP1基因片段,构建重组载体pET-28a(+)-ZYP1,优化大肠杆菌(Escherichia coli)诱导表达体系,将亲和层析纯化后的ZYP1融合蛋白,免疫新西兰大白兔(Oryctolagus cuniculus),制备ZYP1蛋白的多克隆抗体,并通过Western blot和酶联接免疫吸附剂测定(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay,ELISA)确定抗血清的特异性和效价.结果表明,成功构建的拟南芥ZYP1原核表达载体,在大肠杆菌中以1.0 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG),37℃诱导表达4h后,融合蛋白得到高水平表达.所制备的多克隆抗体具有较高的特异性和灵敏性,通过免疫荧光染色,能够检测或定位植物细胞内ZYP1蛋白抗原.同时,免疫荧光分析结果表明,ZYP1蛋白在减数分裂前期过程的细线期开始出现,双线期逐步减少,到达终变期时几乎消失,因此,ZYP1蛋白的动态变化与SC的形成与解散一致,是调控减数分裂期同源染色体联会的重要组成.研究结果有助于深入分析联会复合体相关蛋白ZYP1在植物减数分裂过程中的生物学功能.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨妍	郑州大学生命科学学院	17	14	2.0	2.0
2	田保明	郑州大学生命科学学院	55	632	11.0	24.0
3	位芳	郑州大学生命科学学院	22	30	4.0	4.0
4	刘征	郑州大学生命科学学院	24	117	6.0	9.0
5	毋瑞华	郑州大学生命科学学院	3	4	2.0	2.0
6	程征	郑州大学生命科学学院	1	2	1.0	1.0