小麦ArfGAP基因的克隆、半定量RT-PCR分析及原核表达

• 作者: 张从宇 张子学 时侠清 李文阳 许峰 闫素辉
• 来源期刊: 麦类作物学报
• 学科: 农学
• 关键词: 小麦 ADP核糖基化因子GTP水解酶激活蛋白 半定量RT-PCR 融合蛋白
• 年，卷（期）: 2015,（12）
• 所属期刊栏目: 遗传育种
• 页码范围: 1631-1638
• 页数: 8页
• 分类号: S512.1|S330
• 字数: 5249字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7606/j.issn.1009-1041.2015.12.04

摘要

为明确小麦ArfGAP基因在非生物胁迫中所行使的功能,采用电子克隆技术分离普通小麦ArfGAP基因后对其在不同非生物胁迫下的表达特性进行了分析,并在大肠杆菌中表达了该基因.结果表明,从扬麦18号中克隆得到的TaArfGAP基因ORF全长为2 121 bp.生物信息学分析表明,TaArfGAP蛋白氨基端方向存在一个典型的ArfGAP蛋白结构域,在亲缘关系上与山羊草、乌拉尔图小麦和短柄草较近,而与甘蓝等作物关系较远.半定量RT-PCR分析表明,TaArfGAP基因在干旱、PEG和NaCl胁迫下显著上调表达,但在高温条件下则显著下调表达.SDS-PAGE检测结果表明,IPTG终浓度为0.8～1.0 mmol·L-1、诱导温度为24℃及诱导时间为10h时,在分子量大小为81 kD左右可以得到较大的可溶性表达蛋白量,且与预期结果一致,说明TaArfGAP基因在原核表达体系中成功表达.