海蚯蚓蛋白酶基因的原核表达及其抗肿瘤活性

• 作者: 于文静 初金鑫 张金宝 杜长青 赵春玲 连波 鞠吉雨
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 海蚯蚓 丝氨酸蛋白酶 原核细胞 基因表达 抗肿瘤活性
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 488-492
• 分类号: R730.54
• 语种: 中文

摘要

目的 原核表达海蚯蚓蛋白酶基因,探讨其对肿瘤细胞增殖的抑制作用.方法 根据环节动物门蚯蚓和单环刺螠丝氨酸蛋白酶cDNA序列多重比对获得的保守序列设计引物,从海蚯蚓肠道组织提取总RNA,经3'RACE和5'RACE技术分别克隆海蚯蚓蛋白酶cDNA序列的3 '端和5 '端,并进行拼接,对其编码的蛋白质作生物信息学分析;将海蚯蚓蛋白酶成熟肽的编码序列亚克隆至原核表达载体pET-21a(+),转化大肠埃希菌BL21(DE3)进行诱导表达,采用组氨酸亲和层析柱纯化;MTT法检测重组蛋白的抗肿瘤活性.结果 经3 '端RACE技术获得约250 bp的海蚯蚓蛋白酶基因cDNA 3'端序列,再经5'RACE技术扩增获得约770 bp的cDNA 5'端序列,拼接可得海蚯蚓蛋白酶cDNA序列全长为880 bp,其编码蛋白含270个氨基酸,具有高度保守的GDSGGP序列;重组蛋白相对分子质量为27 000,主要以包涵体形式表达,约占菌体总蛋白的30％,上清纯化后纯度可达95％;重组蛋白酶对人肿瘤细胞增殖具有明显的抑制作用.结论 原核表达了海蚯蚓蛋白酶,可明显抑制人肿瘤细胞的增殖,为抗肿瘤基因工程药物的研发提供了实验依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张金宝	潍坊医学院基础医学院	20	65	5.0	7.0
2	于文静	潍坊医学院药学与生物科学学院	21	65	5.0	7.0
3	鞠吉雨	潍坊医学院基础医学院	39	101	5.0	8.0
4	初金鑫	潍坊医学院药学与生物科学学院	9	30	4.0	5.0
5	杜长青	潍坊医学院药学与生物科学学院	6	19	2.0	4.0
6	赵春玲	潍坊医学院药学与生物科学学院	15	31	3.0	5.0
7	连波	潍坊医学院药学与生物科学学院	24	70	6.0	7.0