黄瓜CsERECTA基因的原核表达及其多克隆抗体制备

• 作者: 李玉红 王琪琦 秦亚光 胡亮亮 赵子瑶 陈鹏
• 来源期刊: 西北植物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 黄瓜 CsERECTA基因 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 研究技术与方法
• 页码范围: 1031-1038
• 页数: 8页
• 分类号: Q785|Q786
• 字数: 6638字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7606/j.issn.1000-4025.2016.05.1031

摘要

ERECTA基因编码一个富含亮氨酸重复序列结构的丝/苏氨酸类受体蛋白激酶,参与调控植物器官的形态建成,在株型控制及抗逆方面也有重要作用.该研究通过构建带有maltose binding protein (MBP)标签的pET21a-CsERECTA融合蛋白原核表达载体,实现了在大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3)中的高效表达,并对诱导表达的温度、时间和IPTG浓度进行了优化.利用镍离子螯合层析纯化得到MBP-CsERECTA融合蛋白,再用rTEV蛋白酶对其进行酶切,得到CsERECTA蛋白并制备了该蛋白的多克隆抗体.结果表明,黄瓜CsERECTA蛋白以可溶和包涵体2种形式表达,低温有助于蛋白以可溶性形式大量存在.最佳诱导温度为23℃,诱导时间为6h,IPTG浓度为0.5 mmol·L-1.通过Western blot可检测到黄瓜内源的CsERECTA蛋白,说明制备的多可隆抗体具有较好的特异性.多克隆抗体的成功制备为进一步研究CsERECTA的功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李玉红	西北农林科技大学园艺学院	44	605	14.0	23.0
2	陈鹏	西北农林科技大学生命科学学院	65	668	14.0	23.0
3	王琪琦	西北农林科技大学园艺学院	2	10	2.0	2.0
4	胡亮亮	西北农林科技大学园艺学院	3	10	2.0	3.0
5	赵子瑶	西北农林科技大学园艺学院	3	10	2.0	3.0
6	秦亚光	西北农林科技大学园艺学院	3	10	2.0	3.0