日本鳗鲡胰蛋白酶的分离纯化及性质分析

• 作者: 张凌晶 曹敏杰 李辉 章骞 翁凌 钟毅雪
• 来源期刊: 集美大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 日本鳗鲡 胰蛋白酶 纯化 性质
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 水产、食品与生物技术
• 页码范围: 99-106
• 页数: 8页
• 分类号: Q556.3
• 字数: 4746字
• 语种: 中文

摘要

通过硫酸铵分级盐析、DEAE-Sepharose阴离子交换柱层析、Phenyl-Sepharose疏水柱层析、Sephacryl S-200凝胶过滤柱层析等方法,从日本鳗鲡(Anguilla japonica)肝胰腺中分离纯化得到胰蛋白酶,SDS-PAGE显示其分子质量为21.5 ku.以Boc-Phe-Ser-Arg-MCA为底物,胰蛋白酶最适温度和最适pH值分别为40℃和8.5.动力学实验表明,Km值和kcat值分别为3.1μmol/L和59.9 s-1.丝氨酸蛋白酶抑制剂Pefabloc SC、PMSF、benzamidine、STI等对其有特异抑制效果.底物特异性结果显示,该酶特异分解Arg和Lys残基的C端.肽质量指纹图谱获得5个片段,共76个氨基酸残基,与基因文库中的日本鳗鲡胰蛋白酶氨基酸序列完全相同.说明本研究所纯化的蛋白质为胰蛋白酶.