甘肃红豆草BAN基因克隆与双标记选择表达载体构建

• 作者: 冯玉兰 姜寒玉 李玉珠 杨江伟 董文科 陈春艳 马晖玲
• 来源期刊: 核农学报
• 关键词: 甘肃红豆草 基因克隆 表达分析 载体构建
• 年，卷（期）: 2016,（10）
• 所属期刊栏目: 植物诱变育种·农业生物技术
• 页码范围: 1880-1888
• 语种: 中文
• DOI: 10.11869/j.issn.100-8551.2016.10.1880

摘要

为探讨编码花青素还原酶BAN基因的功能及其与缩合单宁合成的关系,根据BAN基因序列设计特异引物,采用RT-PCR技术获得甘肃红豆草BAN的相似基因;利用生物信息学相关软件分析,预测其cDNA序列编码的蛋白质结构和功能;采用Real-time PCR法检测该基因在甘肃红豆草各组织中的表达;构建含有BAN基因的双标记选择载体.结果表明,克隆的BAN基因与报道的BAN基因序列相似性达到99.41％,其ORF长为1 020 bp,可编码339个氨基酸残基,具有花青素还原酶保守结构域和重要功能位点;三级结构预测显示,预测模型与花青素还原酶单体结构(C2RH8A)相似,属于短链脱氢/还原酶超家族成员,表明其可能具有花青素还原酶的功能.BAN基因在各组织中均表达,其表达量依次为荚果、叶、蕾、花、茎.以此为靶序列,构建携带抗除草剂bar和绿色荧光蛋白GFP基因的双标记选择植物表达载体,将为缩合单宁合成、代谢的进一步研究及抗除草剂和抗臌胀病牧草新品种的培育奠定基础.