大鼠 sFcγRIIb 基因原核表达及活性鉴定

• 作者: 刘中成 刘利鹏 崔哲 张艳芬 毕克维 王南南 陈瑶
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 抑制性受体 FcγRIIb 基因 原核表达 重组蛋白
• 年，卷（期）: 2016,（9）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 165-171
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.09.022

摘要

旨在克隆大鼠 FcγRIIb 基因，构建 sFcγRIIb 原核表达体系，制备重组大鼠 sFcγRIIb 蛋白。采用 RT-PCR 技术从RBL-2H3细胞中克隆 FcγRIIb 胞外区基因，构建重组表达质粒转化大肠杆菌诱导表达，镍柱亲和层析纯化重组蛋白，复性后利用 Western blotting、ELISA 进行鉴定。结果显示，成功克隆大鼠 sFcγRIIb 基因，构建原核表达载体 sFcγRIIb-pET17b，转化大肠杆菌 BL21（DE3）。通过对表达体系进行优化，确定 IPTG 浓度为1.0 mmol/L，诱导时间为4 h 时蛋白表达效率最高，重组蛋白主要以包涵体形式存在。包涵体经8 mol/L 尿素溶解，利用 Ni-NTA 柱亲和层析获得了较高纯度的重组蛋白。采用梯度透析复性法对sFcγRIIb 进行复性后，经 Western blotting、ELISA 与竞争性 ELISA 鉴定，重组蛋白 sFcγRIIb 可被特异性抗体所识别且与 IgG 具有结合能力。成功建立了大鼠 FcγRIIb 基因原核表达体系，制备了具有生物学功能的重组蛋白。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	崔哲	河北大学药学院	13	59	5.0	7.0
2	刘利鹏	河北大学药学院	8	53	4.0	7.0
3	刘中成	河北大学药学院	22	150	4.0	12.0
4	张艳芬	河北大学科学技术处	20	118	3.0	10.0
5	陈瑶	河北大学药学院	5	14	3.0	3.0
6	毕克维	河北大学药学院	1	0	0.0	0.0
7	王南南	河北大学药学院	3	5	2.0	2.0