Mir-148a 慢病毒表达载体构建及其稳定表达细胞系的筛选

• 作者: 彭小宁 李悦 王照飞 罗艳红 谌思
• 来源期刊: 湖南师范大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: mir-148a 慢病毒载体 神经胶质瘤细胞 q RT-PCR
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 5-8
• 页数: 4页
• 分类号: R735.7
• 字数: 3823字
• 语种: 中文

摘要

目的：构建人源性 mir-148a 慢病毒过表达载体，并筛选过表达 mir-148a 稳定细胞株 U251、U87、BT325，鉴定 mir-148a 在稳定细胞系中的表达水平。方法：设计并合成 mir-148a 上下游引物，PCR 扩增 mir-148a基因片段，经过酶切后克隆至慢病毒载体上，构建 pGC-FU-3FLAG-SV40-EGFP-IRES-puromycin-mir-148a 过表达载体，在293T 细胞中与 pHelper1.0、pHelper2.0包装产生慢病毒，测定 mir-148a 慢病毒滴度。用构建好的慢病毒感染神经胶质瘤细胞系 U251、U87、BT325，用嘌呤霉素筛选，筛选稳定细胞系后 qRT-PCR 检测 mir-148a 的表达情况。结果：测序结果证明 mir-148a 慢病毒载体构建成功并获得了相应的慢病毒。嘌呤霉素筛选后获得稳定表达mir-148a 的 U251、U87、BT325细胞系，mir-148a 表达水平在三种细胞中分别升高167.38倍、7.19倍、11.46倍。结论：成功构建了 mir-148a 的慢病毒载体，筛选得到了 mir-148a 过表达稳定胶质瘤细胞系 U251、U87、B325。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	彭小宁	湖南师范大学医学院	28	100	5.0	9.0
2	罗艳红	湖南师范大学医学院	3	0	0.0	0.0
3	李悦	湖南师范大学医学院	3	0	0.0	0.0