艰难梭菌毒素A原核表达及重组蛋白纯化

• 作者: 刘红菊 吴爱武
• 来源期刊: 中国微生态学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 艰难梭菌毒素A 原核表达 重组蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 400-404
• 分类号: R378.8
• 语种: 中文
• DOI: 10.13381/j.cnki.cjm.201604007

摘要

目的 构建艰难梭菌(Clostridium difficile,C.difficile)毒素A羧基末端原核表达载体,优化诱导表达条件及纯化重组蛋白.方法 利用聚合酶链式反应扩增C.difficile毒素A羧基末端基因序列,并将此序列转入pET-28b载体,构建pET-28b-tcdA重组表达载体,并将表达载体转化到BL21(DE3)感受态大肠埃希菌细胞中,分别在不同条件下进行诱导表达,获得最佳诱导表达条件后进行大量表达,最后用Ni柱对重组蛋白进行亲和纯化,得到纯化后的重组蛋白.结果 成功构建了pET-28b-tcdA重组表达载体,其重组蛋白表达最佳诱导条件:菌液吸光度值取0.6、温度取25℃、IPTG终浓度取1.0 mmol/L、诱导时间取10h.蛋白纯化咪唑磷酸盐洗脱液最佳浓度取200 mmol/L.结论 成功构建pET-28b-tcdA重组表达载体,在大肠埃希菌BL21 (DE3)中可以有效表达,并获得高浓度重组蛋白,为进一步制备TcdA适配子奠定了一定实验室基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴爱武	广州医科大学金域检验学院	35	87	6.0	6.0
2	刘红菊	广州医科大学金域检验学院	3	2	1.0	1.0