中国鲎内脏N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的分离纯化及其酶学性质

• 作者: 林建城 罗新明 许恒棋
• 来源期刊: 中国海洋大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 中国鲎 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶 分离纯化 酶学性质
• 年，卷（期）: 2017,（9）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 62-69
• 页数: 8页
• 分类号: Q556.2
• 字数: 6126字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16441/j.cnki.hdxb.20160301

摘要

以中国鲎(Tachypleus tridentatus)内脏为材料,分别通过30%和80%饱和度(NH4)2SO4沉淀分级分离、葡聚糖凝胶柱Sephadex G-200层析、以及离子交换柱DEAE-32层析,从而获得N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(EC3.2.1.52,NAGase),经PAGE检定达到电泳纯,酶的比活力为505.21 U/mg.SDS-PAGE显示一谱带,测得该酶蛋白亚基分子量为121.5 kDa,等电聚焦电泳法测得酶的等电点pI为6.01.以pNP-β-D-GlcNAc为底物,研究NAGase催化反应的动力学参数.结果表明:中国鲎NAGase的最适pH、最适温度、Km和Vmax分别为5.4和55 ℃、0.421 mmol/L和13.158 μmol/L·min-1;酶在pH=4.5~7.0范围内较稳定,在20~50 ℃之间具有较好的热稳定性.酶在276 nm波长处有紫外吸收峰,在232.2 nm波长的内源荧光激发下,酶内源荧光发射光谱峰在330.9 nm波长处.Na+,K+和Li+对NAGase活力没有影响,Ca2+、Ba2+和Co2+对NAGase有不同程度的激活作用,Co2+对NAGase的激活作用较大,5 mmol/L Co2+能使NAGase活力提高41.67%;Mg2+、Cu2+、Zn2+、Mn2+、Fe3+、Al3+、Pb2+、Ag+、Cd2+和Hg2+等10种金属离子对NAGase活力有不同程度的抑制作用,5 mmol/L Cd2+可使酶活力丧失85.60%,而Hg2+对酶的抑制作用最强,0.1 mmol/L Hg2+可使酶活力丧失90.10%.EDTA对酶活力没有影响,推断中国鲎NAGase属于非金属酶类.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	林建城	莆田学院环境与生物工程学院福建省新型污染物生态毒理效应与控制重点实验室	46	267	11.0	14.0
2	许恒棋	莆田学院环境与生物工程学院福建省新型污染物生态毒理效应与控制重点实验室	1	3	1.0	1.0
3	罗新明	莆田学院环境与生物工程学院福建省新型污染物生态毒理效应与控制重点实验室	1	3	1.0	1.0