尼罗罗非鱼肝脏N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的分离纯化及酶学性质分析

• 作者: 孙林浩 张伟妮 袁阳 陈晓佳 黄小红
• 来源期刊: 厦门大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 尼罗罗非鱼 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶 纯化 酶学性质 活性必需基团
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 685-691
• 页数: 7页
• 分类号: Q556.2
• 字数: 4789字
• 语种: 中文
• DOI: 10.6043/j.issn.0438-0479.201810015

摘要

N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)是生物体内主要的溶酶体水解酶之一,广泛存在于动植物和微生物体内.以尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)肝脏作为材料,采用硫酸铵(饱和度30％～70％)分级沉淀、DEAE Sepharose Fast Flow离子交换柱层析、Sephadex G-200分子筛凝胶过滤柱层析的方法分离纯化NAGase,得到比活力为2988 U/mg的酶制剂.经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测呈现单一条带,说明所得酶为PAGE单一纯.通过Sephadex G-200柱层析法测得NAGase的总分子质量为61.8 ku,结合SDS-PAGE结果,说明该酶仅有一个亚基.进一步测定了NAGase的酶学性质:NAGase水解底物对硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(pNP-NAG)的最适温度为55℃,温度稳定范围为0～55℃,超过75℃时则完全丧失活性;NAGase水解底物的最适pH为5.8,pH稳定范围为4.0～9.0,pH大于9.0时几乎完全失活;该酶水解底物的动力学参数K m和vm分别为0.229 mmol/L和9.346μmol/(L·min);运用化学修饰法分析发现二硫键、氨基、组氨酸咪唑基和色氨酸吲哚基均是NAGase的活性必需基团,而精氨酸胍基则不是其活性必需基团.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张伟妮	福建农林大学中西兽医结合与动物保健福建省高校重点实验室	24	264	9.0	16.0
5	黄小红	福建农林大学中西兽医结合与动物保健福建省高校重点实验室	58	436	12.0	18.0
6	陈晓佳	福建农林大学中西兽医结合与动物保健福建省高校重点实验室	4	1	1.0	1.0
7	孙林浩	福建农林大学中西兽医结合与动物保健福建省高校重点实验室	3	1	1.0	1.0
8	袁阳	福建农林大学中西兽医结合与动物保健福建省高校重点实验室	1	1	1.0	1.0