纤维微菌XM-8木聚糖酶基因克隆及酶学性质

• 作者: 刘恒嘉 杜丽琴 罗春雷 蔺小娅 韦宇拓
• 来源期刊: 广西科学
• 学科: 工学
• 关键词: 纤维微菌 木聚糖酶 共表达 水解
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 实验研究类
• 页码范围: 106-111,119
• 页数: 7页
• 分类号: Q78|TQ9251.6
• 字数: 4740字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13656/j.cnki.gxkx.20170119.007

摘要

[目的]为获得可应用于木聚糖水解的酶资源,希望通过筛选分离得到能够水解木聚糖的木聚糖酶产生菌,克隆表达木聚糖酶基因并研究其酶学性质.[方法]从环境中筛选分离出可水解木聚糖的菌株,利用16S rDNA对其进行分子鉴定.扩增其木聚糖酶基因,以pET22b(+)为表达载体,构建共表达重组质粒,转化Escherichia coli BL21(DE3)进行异源表达,并对重组酶进行酶学性质研究.[结果]经16S rDNA鉴定该菌株为纤维微菌.通过PCR成功克隆到该菌的木聚糖酶基因(xyn-8a),并构建共表达质粒pET22b-xyn-8a,实现木聚糖酶Xyn-8a的活性表达.酶学性质研究表明Xyn-8a最适反应温度为60℃,最适反应pH值为6.0,只对木聚糖底物有活性;HPLC分析其水解产物以木二糖为主,还有少量的木糖和木三糖.[结论]XYN-8A在pH值为6的条件下具有较高活力,且可以催化水解反应,在生产低聚木糖方面具有一定的应用价值.