耐热α-淀粉酶的筛选、基因克隆和酶学性质分析

• 作者: 孙靓 廖思明 朱婧 王青艳 申乃坤 陈东 黄日波 黄桂媛 黄纪民
• 来源期刊: 广西科学
• 学科: 生物学
• 关键词: Anoxybacillus sp.GXS-3菌株 重组淀粉酶AmyGX 克隆与表达 酶学性质
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 实验研究类
• 页码范围: 92-99
• 页数: 8页
• 分类号: Q786
• 字数: 5231字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13656/j.cnki.gxkx.20170223.001

摘要

[目的]筛选耐热α-淀粉酶并实现异源表达,同时分析其酶学性质特征.[方法]以M9培养基加上可溶性淀粉作为选择性分离培养基,从腾冲火山温泉土壤中筛选到产淀粉酶的菌株Anoxybacillus sp.GXS-3.根据淀粉酶氨基酸保守序列,设计引物进行PCR扩增,然后对目标序列进行步移扩增,获得淀粉酶基因AmyGX.将AmyGX与表达载体pQE30连接,导入大肠杆菌M15中表达,对重组酶进行分离纯化和酶学性质分析.[结果]AmyGX 基因长1 515 bp,编码505个氨基酸残基,前23个氨基酸残基为信号肽序列;重组质粒pQE30-AmyGX编码的蛋白分子量为58.04 kDa,对可溶性淀粉催化水解反应的最适温度为60℃,最适pH值为8.0,Vmax、Km值分别为 0.19 U/mg、 3.14 mg/mL,热半失活温度T3050值为65.2℃;Zn2+、Cu2+、Co2+、Fe3+、Ba2+对该酶具有明显的抑制作用,Na+、K+对该酶有激活作用,Mg2+、Ca2+的影响则不明显.[结论]AmyGX是一种中等耐温碱性酶,在造纸、洗涤剂生产和有毒废弃物去除等方面具有潜在的应用前景.