遗传密码子扩充系统表达载体及其稳定细胞系的构建

• 作者: 凌焱 李玉霞 杨丹 陈惠鹏 高鹏
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 遗传密码子扩充 非天然氨基酸 慢病毒载体 稳定细胞株
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 410-414
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 3269字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2017.04.002

摘要

目的:构建异源表达遗传密码子扩充系统的HeLa细胞系.方法:用PCR方法扩增MmBocRS、PyltRNA基因,定向克隆到Lenti-EF1α-Puro载体中,构建Lenti-EF1α-BocRS、Lenti-PyltRNA表达质粒;在HEK293T细胞中进行病毒包装,用获得的慢病毒感染HeLa细胞,获得BocRS-tRNACUA稳定细胞株;分别应用实时定量PCR和Western印迹鉴定该稳定细胞系中MmBocRS和PyltRNA的表达;利用转染EGFP的琥珀突变体验证BocRS-tRNACUA稳定细胞株的功能.结果:酶切及测序表明Lenti-EF1 α-BocRS和Lenti-PyltRNA质粒构建正确;实时定量PCR结果显示BocRS-tRNACUA稳定细胞株中PyltRNA的表达量显著提高;Western印迹结果显示BocRS-tRNACUA稳定细胞株中MmBocRS基因的表达量明显高于空白对照;转染EGFP琥珀突变体结果表明,可以通过非天然氨基酸来控制EGFP的表达.结论:构建了能稳定表达MmBocRS和PyltRNA的BocRS-tRNACUA细胞株,并实现了通过非天然氨基酸控制蛋白表达,为研究定点插入非天然氨基酸提供了细胞模型.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈惠鹏	军事医学科学院科技部	143	885	15.0	23.0
2	凌焱	军事医学科学院科技部	14	66	4.0	7.0
3	李玉霞	军事医学科学院卫生勤务与医学情报研究所	13	61	5.0	7.0
4	杨丹	军事医学科学院科技部	2	0	0.0	0.0
5	高鹏	军事医学科学院科技部	2	0	0.0	0.0