生长激素抑制素基因过表达慢病毒载体的构建及鉴定

• 作者: 刘聪慧 夏凤艳 赵倩
• 来源期刊: 华北理工大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 生长激素抑制素 慢病毒 过表达 载体构建
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 356-360
• 页数: 5页
• 分类号: R722
• 字数: 3307字
• 语种: 中文

摘要

目的 探讨构建人生长激素抑制素(Somatostatin,SST)基因过表达慢病毒载体的技术方法 ,为后续构建SST过表达子宫内膜癌细胞系提供基础.②方法 通过设计SST基因引物,使用聚合酶链反应(PCR)的方法 ,扩增SST基因片段;使用EcoR I和BamHI两种限制性内切酶进行双酶切pLVX-mCMV-ZsGreen-PGK-Puro慢病毒载体和目的 基因SST片段,将两者酶切后的片段使用T4 DNA连接酶进行连接,从而使将SST基因插入pLVX-mCMV-ZsGreen-PGK-Puro慢病毒载体上,构建pLVX-SST-mCMV-ZsGreen-PGK-Puro重组载体;运用双酶切后PCR方法 鉴定阳性克隆的pLVX-SST-mCMV-ZsGreen-PGK-Puro载体;将重组载体转染293T细胞(人胚肾细胞),进行慢病毒包装并且观察其感染效率及测定病毒滴度.③结果 通过PCR成功扩增SST基因并连接到pLVX-mCMV-Zs-Green-PGK-Puro慢病毒载体上,通过DNA测序鉴定,并与GenBank上的SST基因标准序列进行对比,证明pLVX-SST-mCMV-ZsGreen-PGK-Puro过表达慢病毒载体构建成功,将其转染293T细胞后可观察到绿色荧光的表达.成功包装SST过表达慢病毒载体然后测其滴度为1.0×108 TU/mL.④结论 成功构建pLVX-SST-mCMV-ZsGreen-PGK-Puro慢病毒载体,为SST基因的后续研究提供了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵倩	华北理工大学研究生院	13	11	2.0	2.0
2	刘聪慧		15	95	6.0	9.0
3	夏凤艳		9	11	1.0	3.0