HIV-1中和抗体2G12真核表达载体的构建及活性检测

• 作者: 周玉柏 曾毅 王晓菲 管永军 贾润清
• 来源期刊: 中华实验和临床病毒学杂志
• 关键词: HIV 中和抗体 DNA载体
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 198-201
• 页数: 4页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1003-9279.2017.03.004

摘要

目的 构建HIV-1中和抗体全基因共表达真核质粒载体,观察其在293T细胞中的表达并检测其活性.方法 合成HIV-1中和抗体2G12轻链可变区(VL)和重链可变区(VH),与含人IgG轻、重链恒定区的载体分别连接,构建出完整的2G12轻链和重链的载体,通过PCR扩增与连接将2G12轻、重链全长构建到真核表达载体pVR中,同时将内部核糖体进入位点(Internal ribosome entry site,IRES)插入到此载体中构建双基因表达系统,重组质粒转染293T细胞进行瞬时表达,ELISA检测抗体表达效果,通过结合实验及中和实验检测细胞上清的结合活性和中和活性.结果 获得可表达人IgG的重组双基因真核表达载体,转染后上清的抗体表达量为6.43 μg/ml,并且抗体保留了原来的结合活性和中和活性.结论 所构建的载体可表达具有较好的结合活性和中和活性的抗体,本研究为真核表达载体表达人HIV中和抗体全基因方面提供了可选择的平台.