大鲵虹彩病毒主要衣壳蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

• 作者: 冯勇 黄谧
• 来源期刊: 湖北农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 大鲵虹彩病毒 衣壳蛋白 原核表达 多克隆抗体 免疫检测
• 年，卷（期）: 2017,（21）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 4146-4150
• 页数: 5页
• 分类号: S947.3|Q786|Q789
• 字数: 4886字
• 语种: 中文
• DOI: 10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2017.21.037

摘要

根据大鲵虹彩病毒(Chinese giant salamander iridovirus,GSIV)主要衣壳蛋白(Major Capsid Protein,MCP)基因设计引物,PCR扩增得到MCP基因编码框全长序列1392 bp,将其克隆到原核表达载体pET-32a中,构建了重组原核表达载体pET-32a-MCP,并在大肠杆菌BL21中得到了表达,融合表达的重组蛋白分子量约为70 ku,与预期大小一致,主要以包涵体的形式存在.对IPTG浓度,诱导温度等诱导表达条件进行优化,确定0.5 mmol/L的IPTG于37℃的条件下诱导6 h重组蛋白的表达量最佳.纯化GSIV-MCP重组蛋白免疫新西兰大白兔,制备了GSIV-MCP多克隆抗体,ELISA检测抗体效价大于1:50000.Western blot检测显示该抗体可以特异性识别重组蛋白.间接荧光免疫结果表明,该多克隆抗体可与由GSIV感染引起细胞病变的EPC细胞(GICB)发生特异性的结合.研究为建立GSIV免疫诊断方法以及为研究GSIV MCP基因编码蛋白的功能奠定了前期基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	冯勇	武汉大学基础医学院	10	12	2.0	3.0
2	黄谧	武汉大学基础医学院	1	1	1.0	1.0