构建稳定表达pLVshRNA-EGFP-EBVsponge的SNU719细胞系

• 作者: 俞建昆 杨梦莉 陈香岭 马春霞
• 来源期刊: 贵州医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 细胞系 病毒 胃肿瘤 细胞凋亡 miRNA sponge SNU719
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 435-439
• 页数: 5页
• 分类号: R361.3|R735.2
• 字数: 2606字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19367/j.cnki.1000-2707.2017.04.013

摘要

目的:构建稳定表达pLVshRNA-EGFP-EBVsponge的SNU719细胞系.方法:合成能与EB病毒(EBV)编码的EBV-miR-BART16,EBV-miR-BART4-5p、EBV-miR-BART5-5p及EBV-miR-BART22 miRNAs特异结合的miRNA海绵(miRNA sponge)序列,用PITA软件预测构建的sponge是否结合非特异性miRNAs;构建pLVshRNA-EGFP-EBVsponge载体,与慢病毒包装质粒pH1、pH2共转染293T细胞,包装产生慢病毒颗粒,感染SNU719细胞,经嘌呤霉素筛选获得稳定表达细胞株;Real-time PCR检测细胞中EBV-miR-BART16、EBV-miR-BART4-5p、EBV-miR-BART5-5p及EBV-miR-BART22表达水平.结果:成功构建pLVshRNA-EGFP-EBVspong(命名为pEGFP-EBV-sp);与对照组相比,pEGFP-EBV-sp组中4种microRNA表达水平显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:成功构建稳定表达pEGFP-EBV-sp的SNU719细胞系.