人B7H4启动子荧光素酶报告基因载体的构建及活性分析

• 作者: 周琳琳 张秋玉 林怡婷 林雨虹
• 来源期刊: 现代免疫学
• 学科: 医学
• 关键词: B7H4 启动子 荧光素酶报告基因 载体构建
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 19-24
• 页数: 6页
• 分类号: R392.2
• 语种: 中文

摘要

为构建人B7H4基因启动子荧光素酶报告基因载体,以人外周血单个核细胞基因组DNA为模板,PCR扩增3条不同长度人B7H4启动子序列,并插入PGL3-Basic荧光素酶报告基因载体中;待测序验证后,将3个重组质粒及pRL-TK内参质粒分别共转染HEK-293T细胞,采用双荧光素酶报告基因系统检测其启动子活性.测序结果显示构建的3个人B7H4基因启动子重组载体序列正确;重组载体转染HEK 293T细胞,经双荧光素酶报告基因检测确定重组载体有启动子活性,其中PGL3-hB7H4-0.5 kb重组载体的转录活性较高.本研究成功构建了3条含不同长度的B7 H4启动子序列的荧光素酶报告基因系统,为后续分析人B7H4启动子的转录调控元件及肿瘤微环境中调控B7H4表达的作用因素等研究奠定了实验基础.