同义突变SND1慢病毒质粒的构建及回复表达

• 作者: 哈传博 杨洁 赵然 辛灵彪 雷静 高茹
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: SND1 质粒构建 重叠延伸PCR 同义突变 慢病毒
• 年，卷（期）: 2018,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 329-334,391
• 页数: 7页
• 分类号: Q784
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2018.04.0057

摘要

[目的]构建抵抗shRNA的同义突变SND1慢病毒质粒,并在SND1敲低的卵巢癌细胞系中回复表达SND1.[方法]依据密码子的简并性,针对shRNA识别的序列(TCTCGTCTCAAACTCTATTTG)设计同义突变序列(TAGG-TATAACTTTAACCTGCT)并通过重叠延伸PCR的方法将同义突变序列引入SND1的编码序列中,得到recombinationSND1(rSND1)目的片段,与pLVX-IRES-Hyg载体连接.测序验证pLVX-FLAG-rSND1质粒序列.pLVX-FLAG-rSND1质粒与包装质粒共转染293T细胞,获得携带FLAG-rSND1的慢病毒毒粒.用慢病毒感染SND1敲低的卵巢癌SKOV3-shSND1-2细胞株,经潮霉素B筛选后,用Western Blot检测FLAG和SND1的表达.[结果]抵抗shRNA的真核pLVX-FLAG-rSND1重组慢病毒质粒构建成功,可检测到FLAG及SND1的表达.[结论]成功构建了同义突变SND1的pLVX-FLAG-rSND1质粒并在卵巢癌细胞中回复表达,为继续研究SND1蛋白在卵巢癌中的功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨洁		56	151	7.0	10.0
2	辛灵彪		7	8	2.0	2.0
3	雷静		3	5	2.0	2.0
4	赵然		3	5	2.0	2.0
5	高茹		2	2	1.0	1.0
6	哈传博		1	0	0.0	0.0