猪圆环病毒3型TaqMan荧光定量PCR方法的建立和初步应用

• 作者: 何启盖 库旭钢 朱玲 李畅 李静 王俊伟
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 圆环病毒3型 SYBR荧光定量PCR TaqMan荧光定量PCR 检测
• 年，卷（期）: 2018,（6）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 1320-1326
• 页数: 7页
• 分类号: S852.659.2
• 字数: 4440字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2018.06.026

摘要

为了灵敏而便捷的检测猪圆环病毒3型(PCV3),根据PCV3 ORF2基因组保守序列设计合成4对引物,先使用荧光染料(SYBR)定量PCR法验证其能否有效扩增目的片段,并根据结果和引物对所扩增序列的交集进一步设计TaqMan探针,通过优化反应条件和反应体系建立快速检测PCV3的实时荧光定量PCR检测方法.结果显示,SYBR染料法和 TaqMan探针法均能有效地扩增 PCV3标准质粒以及其他阳性样品,并且对1.29×102～1.29×109拷贝·μL －1的PCV3标准质粒(Pmd18-t-Cap)呈现良好的线性关系,该方法的检测灵敏度为1.29×102拷贝·μL －1,比常规PCR的灵敏度高100倍,该方法与猪圆环病毒2型、猪轮状病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等病毒基因以及猪链球菌、猪肺炎支原体等细菌基因均无交叉反应,具有良好的特异性;批次内重复和批次间重复试验结果显示变异系数(CV)均小于1.5％,呈良好的可重复性.用该方法对2016年至2017年间收集的124份来自湖北省等地的猪病料DNA样品进行检测,结果显示本地区PCV3阳性率为8.06％(10/124),PCV2和PCV3共感染率为8.06％(10/124).上述结果表明,本研究建立TaqMan荧光定量PCR能够灵敏特异的检测圆环病毒3型,为圆环病毒3型的临床检测提供有效手段.