微泡菌ALW1褐藻胶裂解酶AlgL14的表达及信息学分析

• 作者: 倪辉 吴利洋 姜泽东 朱艳冰 梁梅芳 肖安风
• 来源期刊: 集美大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 微泡菌 褐藻胶裂解酶 克隆 基因表达 信息学分析
• 年，卷（期）: 2018,（5）
• 所属期刊栏目: 水产、食品与生物技术
• 页码范围: 341-348
• 页数: 8页
• 分类号: Q939.97
• 字数: 4154字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19715/j.jmuzr.2018.05.004

摘要

以微泡菌(Microbulbifer sp.)ALW1的基因组为模板,使用褐藻胶裂解酶AlgL14特异性引物进行PCR扩增,将扩增产物克隆至pMD18-T载体后进行测序,并对该基因编码的蛋白质序列进行生物信息学分析.将目的基因插入pET-28α(+)表达载体,转入Escherichia.coli BL21(DE3)中进行诱导表达,并利用亲和层析进行重组蛋白纯化.结果显示,克隆基因的大小为1350 bp,预测编码含有449个氨基酸残基的蛋白质.该蛋白质序列与其他菌株来源的褐藻胶裂解酶序列具有一定的相似性,预测克隆的目的基因编码褐藻胶裂解酶,归属于PL-14家族.褐藻胶裂解酶AlgL14的理论分子质量大小为48.772 ku,理论等电点为6.27.采用同源建模法建立菌株ALW1褐藻胶裂解酶AlgL14的三维结构,富含 β-折叠.将目的基因在E.coli BL21(DE3)中进行诱导表达,并纯化获得重组褐藻胶裂解酶.SDS-PAGE分析显示,表达的目的蛋白分子质量约为48.8 ku.