海洋弧菌中褐藻胶裂解酶Alg的克隆表达及酶学性质

• 作者: 张齐 李云涛 汪立平 黄宇良
• 来源期刊: 山东农业大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 褐藻胶裂解酶 海洋弧菌 克隆与表达 电离喷雾质谱 酶学性质
• 年，卷（期）: 2018,（4）
• 页码范围: 659-666
• 页数: 8页
• 分类号: Q819
• 字数: 6581字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2324.2018.04.022

摘要

褐藻胶裂解酶是制备功能性寡糖的关键酶,以基因工程手段构建重组褐藻胶裂解酶,为实现褐藻胶裂解酶向商业酶转化奠定重要基础.以海洋弧菌SS-1总DNA为模板,运用PCR技术克隆得到褐藻胶裂解酶基因Alg,构建重组表达菌株E.coli BL21(DE5α)/pET28a(+)-Alg,进行诱导表达,产物通过Ni-NTA resin亲和层析柱纯化,研究其酶学性质及酶解产物.结果表明,重组酶的最适pH为8.0,在pH 4.0～9.0范围内,30℃条件下保温2 h,仍能保持60％以上的相对酶活力;最适温度30℃,热稳定实验显示在高于30℃保温2 h其残余酶活力损失40％以上;在添加浓度1 mmol/L离子K+、Na+和Mg2+显示对重组酶有明显的促进作用,Cu2+、Fe3+、Ba2+、Fe2+、Al3+、SDS和EDTA等对该酶抑制作用明显;动力学参数Km为5.93 mg/mL,Vmax为826.44 mg/(mL·min);电离喷雾质谱(ESI-MS)分析其降解褐藻胶产物主要为小分子寡糖.重组酶是具有良好的酶学特性及有效的作用poly(M)降解产生低聚寡糖的双功能酶,可用于褐藻寡糖的制备.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄宇良	上海海洋大学食品学院上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心	2	5	1.0	2.0
2	汪立平	上海海洋大学食品学院上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心	35	392	12.0	18.0
6	李云涛	上海海洋大学食品学院上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心	4	11	2.0	3.0
7	张齐	上海海洋大学食品学院上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心	2	2	1.0	1.0