玉米AGPL2蛋白多克隆抗体制备及时空表达分析

• 作者: 余国武 吕亚楠 黄玉碧
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 农学
• 关键词: AGPL2蛋白 基因克隆 原核表达 Western Blotting
• 年，卷（期）: 2018,（6）
• 页码范围: 17-23
• 页数: 7页
• 分类号: Q78|S513.03
• 字数: 5321字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7668/hbnxb.2018.06.003

摘要

为探讨玉米AGPL2在籽粒发育时期淀粉积累过程中的功能机制,通过AGPL2基因克隆和构建带有GST标签的原核表达载体PGEX-6T-1-AGPL2,并利用大肠杆菌诱导表达体系,用0.5 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)在28℃ 条件下诱导表达6 h后,GST-AGPL2融合蛋白能够得到高水平表达,然后利用GST(Glutathione S-transferase)标签蛋白纯化介质进行亲和层析纯化,能够得到质量较高的GST-AGPL2融合蛋白;利用纯化所得的GST-AGPL2重组蛋白免疫新西兰大白兔制备了AGPL2多克隆抗体,分离并纯化抗血清,然后用rTEV Protease去除抗原GST-AGPL2融合蛋白的GST标签,并用纯化后的AGPL2多克隆抗体进行Western Blot检测,结果发现,AGPL2多克隆抗体具有较高特异性和灵敏性,可用于检测纳克级抗原蛋白;并利用Western Blot方法研究了AGPL2蛋白在玉米不同组织和不同授粉时期胚乳中的分布和表达模式,结果显示,AGL2蛋白在玉米不同组织中的表达具有组织特异性,且在胚乳中含量最高.AGPL2蛋白在玉米胚乳不同授粉时期表达量先增加后降低,且在授粉中期达到最大值.其结果与玉米籽粒发育过程中淀粉的积累规律一致,说明AGPL2主要存在于玉米胚乳中,且可能参与淀粉的合成,也说明AGPL2多克隆抗体具有很好的特异性,能够识别玉米体内的AGPL2抗原.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄玉碧	四川农业大学农学院	63	1209	18.0	33.0
5	吕亚楠	四川农业大学农学院	1	1	1.0	1.0
6	余国武	四川农业大学农学院	1	1	1.0	1.0