人HDAC6基因的原核表达纯化和初步功能检测

• 作者: 卫勃 张鹏飞 戴广海 郗洪庆 陈凛 陈志达
• 来源期刊: 解放军医学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: HDAC6去乙酰化酶 GST-HDAC6融合蛋白 组蛋白
• 年，卷（期）: 2018,（12）
• 所属期刊栏目: 基础研究论著
• 页码范围: 1085-1088
• 页数: 4页
• 分类号: R730.5|Q78
• 字数: 3453字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-5227.2018.12.014

摘要

目的 通过获得纯化有活性功能的GST-HDAC6融合蛋白, 为去乙酰化酶调控肿瘤的发生发展机制提供实验基础.方法 采用PCR技术从人乳腺文库中扩增出人组蛋白去乙酰化酶HDAC6全长编码区基因序列, 将其正确插入到pGEX-KG载体中, 重组质粒在大肠埃希菌DH5α中转化表达后, 利用GST-Sepharose 4B亲和株对融合蛋白进行纯化, 以SDS-PAGE和Western blot鉴定表达与纯化产物, 最后通过去乙酰化实验检测融合蛋白的生物活性.结果 从人乳腺文库中扩增获得约3 645 bp的DNA片段, 并成功克隆至pGEX-KG载体上, 经测序与目的序列完全一致;在DH5α大肠埃希菌中诱导表达出相对分子质量 (Mr) 约为170 000的目的蛋白, 经纯化后获得了纯度较高的重组蛋白GST-HDAC6, 去乙酰化酶实验证明该蛋白活性良好.结论 成功获得了活性良好的重组蛋白GST-HDAC6, 为后续研究乙酰化修饰与肿瘤之间的关系奠定了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	戴广海	解放军总医院肿瘤内科	97	512	12.0	16.0
2	陈凛	解放军总医院普通外科	243	1419	18.0	25.0
6	卫勃	解放军总医院普通外科	76	545	13.0	19.0
10	郗洪庆	解放军总医院普通外科	59	270	9.0	13.0
14	陈志达	解放军总医院普通外科	12	31	3.0	5.0
18	张鹏飞	解放军总医院肿瘤内科	5	9	3.0	3.0