pEGFP-N1-HBsAg-ROP2多基因重组表达质粒的构建及表达鉴定

• 作者: 刘功振 孙慧 尹昆 崔勇 徐超 朱嵩 李瑾 肖婷 赵桂华 闫歌 马荣 魏庆宽 黄炳成
• 来源期刊: 中国血吸虫病防治杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 弓形虫病 乙型肝炎 pEGFP-N1 乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg) 弓形虫棒状体蛋白2(ROP2) 质粒构建
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 184-188
• 页数: 5页
• 分类号: R531.8
• 字数: 3702字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16250/j.32.1374.2017245

摘要

目的 构建pEGFP-N1-HBsAg-ROP2重组质粒,并转染HEK293T细胞进行表达鉴定,为弓形虫病核酸疫苗的研制奠定基础.方法 根据HBsAg基因序列和pcDNA3-p30-ROP2重组质粒酶切位点设计引物,PCR扩增HBsAg基因,经酶切、连接、转化,利用HBsAg基因替换p30基因,构建pcDNA3-HBsAg-ROP2重组质粒;经HindⅢ和KpnⅠ双酶切,将HBsAg-ROP2片段与pEGFP-N1真核表达载体相连,构建pEGFP-N1-HBsAg-ROP2重组表达质粒,转染HEK293T细胞,观察其蛋白表达水平.结果 HBsAg片段PCR产物约700 bp,与理论值相符;构建pcDNA3-HBsAg-ROP2重组质粒,双酶切电泳后得到约5.4 kb和1.9 kb的两条带,与预期结果相符.pEGFP-N1-HBsAg-ROP2双酶切后产生约4.7 kb和1.9 kb的条带,经测序鉴定,与GenBank发表的序列同源性为99.84%.目的基因已成功转染入HEK293T细胞中,且正确表达,蛋白浓度为3.08 mg/ml.结论 成功构建pEGFP-N1-HBsAg-ROP2重组表达质粒,转染HEK293T细胞能正确表达.